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纯化色谱系统纯化前的准备工作

点击次数:91发布时间:2022-09-29
  纯化色谱系统使用色谱技术实现物质的分离。气相色谱仪样品在色谱柱中得以分离是基于热力学性质的差异。固定相与样品中的各组分具有不同的亲合力,对气固色谱仪是吸附力不同,对气液分配色谱仪是溶解度不同。当载气带着样品连续地通过色谱柱时,亲合力大的组分在色谱柱中移动速度慢,因为亲合力大意味着固定相拉住它的力量大。亲合力小的则移动快。
 
  检测器对每个进入的组分都给出一个相应的信号。将从样品注入载气为计时起点,到各组分经分离后依次进入检测器,检测器给出对应于各组分的信号(常称峰值)所经历的时间称为各组分的保留时间。
 
  纯化色谱系统的许多功能进一步得到开发和改进,如大体积进样技术,液体样品的进样量增加;检测器也不断改进,灵敏度进一步提高;与功能日益强大的工作站相配合,色谱采样速率显着提高,这为快速色谱分析提供了保证。
 
  纯化前的准备工作:
 
  一、样品稳定性试验。
 
  1、测定样品在pH2-9的稳定性;
 
  2、测定样品在0-4mol/LNaCl及0-2mol/L硫酸铵中的稳定性;
 
  3、测定样品在0-50%乙醇、甲醇中的稳定性;
 
  4、测定样品在4-40℃的稳定性;
 
  5、室温下静置过夜,测定对蛋白水解酶的稳定性。
 
  二、样品预处理:
 
  1、去除样品中颗粒物(0.45-0.22微米膜过滤或者10000g离心15分钟);
 
  2、去除样品中脂类(10000g离心15分钟或有机溶剂抽提);
 
  3、去除样品中核酸(加入核酸酶消化或者使核酸沉淀);
 
  4、抑制样品中蛋白水解酶(加入蛋白酶抑制剂、低温下快速分离或在蛋白酶缺陷宿主中表达重组蛋白)。
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